目前酶聯免疫法檢測用試劑盒種類繁多，在實際檢測中發現，一般在試劑盒說明書中列出以下指標：檢測限；回收率；交叉反應率；標準曲線圖譜及數據，標準曲線至少由5個濃度組成；IC50測定值及變形曲線點數目的是比較規范的試劑盒，可以選擇。

臨界值(cut-off)的確定

在實際使用酶聯免疫法檢測時要首先確定臨界值。通過檢測結果與臨界值的比較，可判定樣品為陰性或可疑。對于禁用藥物，檢測方法的臨界值為定量限，即現有的公認的儀器檢測所能達到的*定量限。對于有*殘留限量(MRL)的藥物，檢測方法的臨界值為20份添加MRL濃度的樣品重復3次測定的均值減去1．64倍標準差。檢測結果如小于臨界值為陰性，大于或等于臨界值或標準規定為可疑，需要用確證法確證。

檢測限的測定 可添加MRL和MRL上下各一個濃度。

每個試驗室在使用酶聯免疫法檢測時，應做一下各自試驗室的檢測限。檢測限為20份空白樣品測定的均值加3倍標準差。如果經規范操作后所得檢測限大于臨界值時，說明試劑盒背景干擾大，試劑盒靈敏度不能滿足檢測要求，應與試劑盒廠家聯系或棄去不用選用另外的試劑盒。

酶聯免疫檢測方法驗證

在使用酶聯免疫法檢測樣品時，應對方法進行驗證。主要測定以下內容：

①標準曲線的測定，標準曲線至少由5個濃度組成，測定次數不少于5次，以確定工作濃度范圍和IC50范圍。一般臨界值為IC50附近，檢測靈敏度高。

②樣品檢測限的測定。

③樣品添加回收實驗。對禁用藥物可添加定量限和2倍定量限，對于有*殘留限量(MRL)的藥物，可添加MRL和MRL上下各一個濃度。

準確度：若回收率大于40％符合相應檢測標準的要求。精密度：批內變異系數每批平行樣之間的變異系數小于或等于25％，對于禁用藥物小于或等于30％。批間變異系數所有樣品間變異系數小于或等于30％，對于禁用藥物小于或等于40％。滿足以上準確度和精密度要求，說明酶聯免疫方法可行，可用來檢測藥物殘留。

其他

①對于可用于多殘留檢測的試劑盒，以交叉反應率低的藥物做陽性添加測定臨界值(cut-off)。

②實際檢測樣品時要包括以下實驗：至少做兩條標準曲線，兩個陰性對照品，兩個添加臨界值(cut-off)的陽性對照品，兩個平行的待檢樣品。檢測結果出來后通過標準曲線形狀(符合檢測要求為S形)，IC50與臨界值是否相近及陽性樣品回收率，樣品平行情況可確定檢測是否可信