人elisa試劑盒
人褪黑素（MT）ELISA試劑盒
人褪黑素（MT）ELISA試劑盒
本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中人褪黑素（MT）的含量
有效期：6個月
保存條件：2-8℃
本試劑盒僅供科研使用，不得用于臨床診斷
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人褪黑素（MT）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人褪黑素（MT）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20
分鐘，取上清即可，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內于2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
3. 組織勻漿：用預冷的PBS
(0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果），稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測。
4. 細胞培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融。
注：標本溶血會影響最后檢測結果，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
試劑盒組成
|
名稱 |
96孔配置 |
48孔配置 |
備注 |
|
微孔酶標板 |
12孔×8條 |
12孔×4條 |
無 |
|
標準品 |
0.3mL*6管 |
0.3mL*6管 |
無 |
|
樣本稀釋液 |
6mL |
3mL |
無 |
|
檢測抗體-HRP |
10mL |
5mL |
無 |
|
20×洗滌緩沖液 |
25mL |
15mL |
按說明書進行稀釋 |
|
底物A |
6mL |
3mL |
無 |
|
底物B |
6mL |
3mL |
無 |
|
終止液 |
6mL |
3mL |
無 |
|
封板膜 |
2張 |
2張 |
無 |
|
說明書 |
1份 |
1份 |
無 |
|
自封袋 |
1個 |
1個 |
無 |
備注：
1. 標準品濃度依次為：16、8、4、2、1、0.5 pg/mL
2. 經過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗。